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                    ELISA試劑盒實驗“花板”問題分析

                    發(fā)布時間: 2013-10-30  點擊次數(shù): 931次

                    ELISA試劑盒結(jié)果“花板”的問題對檢測數(shù)據(jù)造成了很大影響,往往會使檢測者做出誤判,是實驗中必須要注意和避免的。

                    使用ELISA試劑盒對血液HBsAg-HCV-HIV及梅毒等實驗檢測的結(jié)果中,空白和陰性,陽性對照以及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常,根據(jù)衛(wèi)生部臨檢中心提供的數(shù)據(jù),HBsAg0.5ng1ng-HCV-HIV梅毒正常范圍均為2NCU,但血液標(biāo)本孔的OD值比較高(大多數(shù)OD值≥0.070)。標(biāo)本的陽性率很高,每板除對照孔外,有時陽性高達(dá)10孔之多,而大多數(shù)真陽性標(biāo)本都出現(xiàn)弱陽性結(jié)果。

                    針對這種“花板”現(xiàn)象我們通過多次實驗的分析和判斷,總結(jié)了一些經(jīng)驗,分析如下:

                     

                    1 標(biāo)本、試劑、儀器

                    1.1 標(biāo)本 出入境人員的血液標(biāo)本。

                    1.2 試劑 HBsAg、HCV、HIV、梅毒試劑均為不同廠家的ELISA試劑盒。

                    1.3 儀器 LD4-2型腦心機BID RAD1575型洗板機BID RAD550酶標(biāo)儀。

                     

                    2 方法

                      所有被檢出入境人員的血液標(biāo)本,按照各個廠家提供的ELISA試劑盒說明書進(jìn)行HBsAg-HCV-HIV梅毒等檢驗項目操作。所有試劑均在有效期內(nèi)使用。

                     

                    3 結(jié)果

                      所使用不同廠家的試劑有時會出現(xiàn)“花板”問題。

                     

                    4 分析

                      在所有標(biāo)本進(jìn)行檢測的過程中,所用的儀器及加樣過程都處于正常狀態(tài)的情況下,步驟均按照各種試劑說明書的要求去做,排除實驗所用儀器和操作步驟對實驗結(jié)果的影響外,ELISA試劑盒內(nèi)的空白、陰性和陽性對照以及室內(nèi)質(zhì)控值都很正常,只有檢測的血液標(biāo)本情況異常。根據(jù)國家和疾控中心報告陽性率的比例不應(yīng)該是很高的情況下,HBsAg在用ELISA之前都經(jīng)過了快速金標(biāo)試劑的檢測,陽性標(biāo)本得到了一定的控制。因此,原因可能是在標(biāo)本的處理,特別是放置時間、離心速度和離心時間方面的問題。所以,標(biāo)本的處理就成為實驗結(jié)果的主要可疑因素。

                    為了避免“花板”現(xiàn)象的出現(xiàn),降低檢測的假陽性率,獲取準(zhǔn)確的實驗結(jié)果,應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便省時的ELISA試劑。

                    實驗過程中應(yīng)該注意的問題:

                    (1)抽取樣本時應(yīng)抽出足夠檢驗量的血液標(biāo)本,按比例加抗凝劑,便于離心,得到足夠的血清(血漿)。

                    (2)血液標(biāo)本應(yīng)置于室溫下1~2h,使血液凝固收縮,然后離心檢測或讓血液后再檢測。這樣才能使得血液充分收縮,讓標(biāo)本中的非特異性物質(zhì)所致的假陽性率降至zui低。

                    (3)檢測之前,加大離心轉(zhuǎn)速,盡量延長時間,使血細(xì)胞和纖維蛋白充分沉淀,讓血細(xì)胞與血清*分離。

                    (4)加樣時不能加入紅細(xì)胞或纖維蛋白,要按照操作說明書去做,否則會影響實驗結(jié)果。

                    (5)封板溫育時,各孔一定要封嚴(yán),防止陽性標(biāo)本的液體蒸發(fā),產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。

                    (6)手工洗板時應(yīng)注意液體被濺出或孔與孔之間的液體溢出,連成整體液面后產(chǎn)生“花板”。用洗板機洗板時應(yīng)防止針口有纖維蛋白或異物,這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。

                     

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