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                    ELISA試劑盒的應(yīng)用與操作步驟

                    發(fā)布時(shí)間: 2013-10-28  點(diǎn)擊次數(shù): 1028次

                    ELISA試劑盒的應(yīng)用:

                      1、免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。

                      2、研究抗酶抗體的合成。

                      3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。

                      4、定量檢測(cè)體液中抗原或抗體成份。


                    ELISA試劑盒的操作步驟:

                      一、雙抗體夾心法

                      1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌,下同)。

                      2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。

                      3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),洗滌。

                      4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

                      5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

                      6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。

                      二、間接法

                      1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃;

                      2.次日洗滌3次;

                      3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌;

                      4.(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml;

                      5.37℃孵育35-60分鐘,洗滌;

                      6.’zui后一遍用DDW洗滌。

                      其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

                     研域(上海)化學(xué)試劑主要代理產(chǎn)品:

                      ELISA試劑盒:ELISA試劑盒,ELISA檢測(cè)試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,雞、鴨、猴、兔的ELISA試劑盒。

                      進(jìn)口培養(yǎng)基:微生物培養(yǎng)基,顯色培養(yǎng)基,大腸桿菌O157培養(yǎng)基,細(xì)菌總數(shù)培養(yǎng)基,弧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基,李斯特氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基。

                      血清:胎牛血清,人血清,動(dòng)物血清。

                      生物試劑:Amresco,Sigma,Spectrum進(jìn)口試劑。

                      標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品:進(jìn)口對(duì)照品,進(jìn)口對(duì)照藥材,進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品,進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)試劑。

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