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                    用人血清進(jìn)行噬菌體ElISA

                    發(fā)布時(shí)間: 2011-10-15  點(diǎn)擊次數(shù): 1979次

                    用人血清進(jìn)行噬菌體ElISA

                    [器材和試劑]
                    ● 包被緩沖液
                    ● PBST
                    ● PBBST[PBS,1%TritonX—100,3% BSA(Sigma)]
                    ● 兔抗人Fc—特異性IgG(Pierce):用包 被緩沖液稀釋為5.0ug/ml①
                    ● HRP標(biāo)記的抗噬菌體抗體(Amersham Biosciences):用封閉液以1/10000比例 稀釋
                    ● 顯色液[3,3’,5,5’—四甲基聯(lián)苯胺 (TMB)液體底物系統(tǒng),Sigma]

                    [方法]
                    1.將200ul兔抗人Fc—特異性IgG等量分加到各孔中。4℃孵育過(guò)夜。
                    2.用PBST洗滌多孔板。
                    3.加250ul PBBST。37℃孵育2小時(shí)。
                    4.棄去PBBST,將200ul噬菌體上清等量加入各孔。每孔中加入0.25ul血清,37℃振 蕩孵育60分鐘。
                    5,用PBST洗滌板孔。
                    6.加200gl HRP標(biāo)記的羊抗噬菌體抗體。37℃振蕩孵育30分鐘。
                    7.用PBST洗滌板孔。
                    8.每孔中加200ul顯色液。室溫避光孵育15分鐘。加25ul 2mol/L H2S04終止反應(yīng)。分 析前在酶標(biāo)儀中振蕩10秒。
                    9.用自動(dòng)酶標(biāo)儀將A405和A655間的差值作為結(jié)果記錄。
                     

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